fa پلی‏اتیلن گلیکول 200؛ روشی سریع و ارزان برای استخراج DNA از باکتری‏های گرم‌مثبت و گرم‌منفی پزشكي آزمايشگاهی Laboratory Medicine پژوهشی Original <p dir="RTL"><strong>اهداف:</strong> به‌طور کلی استخراج <span dir="LTR">DNA</span> از باکتری&rlm;های گرم‌مثبت بسیار مشکل و پرهزینه است. هدف از این مطالعه استفاده از پلی&rlm;اتیلن گلیکول 200 به منظور استخراج <span dir="LTR">DNA</span> از باکتری گرم‌مثبت <em>لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس</em> و باکتری گرم‌منفی <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> و انجام <span dir="LTR">PCR</span> روی آنها به منظور جست‌وجو به ترتیب برای ژن&rlm;های <em><span dir="LTR">Lacto</span></em> و <em><span dir="LTR">ExoA</span></em> بود.</p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش&rlm;ها:</strong> در این مطالعه سویه&rlm; استاندارد باکتری گرم‌مثبت <em>لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس</em> و باکتری گرم‌منفی <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> به ترتیب بر روی محیط کشت <span dir="LTR">MRS</span> آگار و مولرهینتون آگار کشت داده شدند. سپس کلونی باکتری در بافر <span dir="LTR">TE</span> حل شد و با استفاده از <span dir="LTR">PEG 200</span> استخراج <span dir="LTR">DNA</span> انجام شد. واکنش <span dir="LTR">PCR</span> بر روی ژن&rlm;های <em><span dir="LTR">Lacto</span></em> (اختصاصی <em>لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس</em>) و <em><span dir="LTR">ExoA</span></em> (سودوموناس آئروژینوزا) اختصاصی هر ارگانیسم انجام شد.</p> <p dir="RTL"><strong>یافته&rlm;ها:</strong> <span dir="LTR">PCR</span> روی ژن&rlm;های انتخاب‌شده برای هر اُرگانیسم انجام و وجود ژن&rlm;های <em><span dir="LTR">Lacto</span></em> با اندازه 231<span dir="LTR">bp</span> برای سویه استاندارد <em>لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس</em> و سویه <em>لاکتوباسیلوس اسیدوفیلوس</em> جداشده از لبنیات و <em><span dir="LTR">ExoA</span></em> با اندازه 396<span dir="LTR">bp</span> برای سویه استاندارد <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> و سویه&rlm;های بالینی <em>سودوموناس آئروژینوزا</em> روی ژل آگارز مشاهده شد.</p> <p dir="RTL"><strong>نتیجه&rlm;گیری: </strong>از آنجایی که استخراج <span dir="LTR">DNA</span> از باکتری&rlm;های گرم‌مثبت به دلیل داشتن دیواره بسیار محکم مشکل است، استفاده از <span dir="LTR">PEG 200</span> می&rlm;تواند روش بسیار مناسب، مقرون به‌صرفه و بسیار سریع و در دسترس برای استخراج <span dir="LTR">DNA</span> از باکتری&rlm;های گرم‌مثبت باشد. علاوه بر این، با استفاده از این روش می&rlm;توان به آسانی <span dir="LTR">DNA</span> باکتری&rlm;های گرم‌منفی و قارچ&rlm;ها را نیز استخراج نمود.</p> <p style="margin-left: 42.55pt;"><strong>Aims: </strong>In general, DNA extraction from the gram-positive bacteria is too hard and expensive. The aim of this study was to utilize Polyethylene Glycol 200 in order to extract DNA from Lactobacillus acidophilus gram-positive bacteria and Pseudomonas aeruginosa gram-negative bacteria, as well as PCR conducting on them to search Lacto and ExoA genes, respectively.</p> <p style="margin-left: 42.55pt;"><strong>Materials & Methods:</strong> Standard strains of Lactobacillus acidophilus gram-positive bacteria and Pseudomonas aeruginosa gram-negative bacteria were cultured on MRS and Mueller-Hinton agar, respectively. Then, the bacteria colony was dissolved in TE buffer and DNA was extracted using PEG 200. PCR reactions were done on the specific Lacto and ExoA genes of each organism.&nbsp;&nbsp;</p> <p style="margin-left: 42.55pt;"><strong>Findings:</strong> PCR was done on the selected genes for each organism; and bp231 Lacto genes were detected for the standard strain of Lactobacillus acidophilus and the strain of Lactobacillus acidophilus separated from the dairy. In addition, bp396 ExoA genes were detected for the standard strain of Pseudomonas aeruginosa and the clinical strains of Pseudomonas aeruginosa on agarose gel.</p> <p style="margin-left: 42.55pt;"><strong>Conclusion:</strong> Since DNA extraction from gram-positive bacteria is too hard due their very strong walls, PEG 200 might be a very proper, affordable, quick, and available method to extract DNA from the gram-positive bacteria. In addition, DNA of gram-negative bacteria and fungi can simply be extracted through the method.</p> پلی‏اتیلن گلیکول 200, استخراج DNA, باکتری‏های گرم‌مثبت, باکتری‏های گرم‌منفی Polyethylene Glycol 200, DNA Extraction, Gram-Positive Bacteria, Gram-Negative Bacteria, 7 11 http://imtj.gmu.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-5-11&slc_lang=fa&sid=1 J Mardaneh جلال مردانه 8000319475328460019965 8000319475328460019965 No Microbiology Department, Medicine School, Gonabad University of Medical Sciences, Gonabad, Iran گروه میکروبگروه میکروب‏شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گناباد، گناباد، ایران‏شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گناباد، گناباد، ایران AR Mohammadzadeh علیرضا محمدزاده alm13604@gmail.com 8000319475328460019966 8000319475328460019966 Yes Microbiology Department, Medicine School, Gonabad University of Medical Sciences, Gonabad, Iran گروه میکروب‏شناسی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گناباد، گناباد، ایران Z Masomian زهره معصومیان 8000319475328460019967 8000319475328460019967 No Student Research Committee, Gonabad University of Medical Sciences, Gonabad, Iran کمیته تحقیقات دانشجویی، دانشگاه علوم پزشکی گناباد، گناباد، ایران